Как узнать резус-фактор крови?

Резус-фактор – один из параметров крови, который отражает присутствие или отсутствие на мембранах красных клеток особого белка Rh. В случае, если он есть, кровь резус-положительная и обозначается Rh+, при его отсутствии резус-отрицательной – Rh-.

Этот белок есть на эритроцитах большинства живущих на планете, но примерно у 15 % его нет. Его отсутствие или присутствие никак не сказывается на здоровье. Rh передается от родителей и на протяжении всей жизни остается неизменным.

Когда сдают анализ на Rh

Определение резус-фактора происходит во время анализа крови на группу. Эта информация необходима при переливании, при подготовке к хирургическому вмешательству и в период вынашивания плода.

Во время беременности может произойти конфликт между кровью будущей матери и кровью ребенка. Зная о том, что женщина резус-отрицательная, врачи могут заранее предпринять меры, чтобы избежать конфликта и сохранить здоровье резус-положительного плода.

Сдать кровь на резус можно в лаборатории любой поликлиники или в стационаре. Для исследования делают забор из пальца или из вены.

Как определяют

Методов определения Rh несколько:

• На чашках Петри методом конглютинации.
• С помощью цоликлонов.
• Экспресс-методом в пробирках без подогрева.
• Желатиновым методом.

Суть анализа заключается в выявлении антигена D с помощью антирезусных сывороток или моноклональных реагентов (цоликлонов) в реакции агглютинации (склеивания эритроцитов и образования хлопьев) в пробирках или на плоскости.

Комплекс препаратов для определения Rh-принадлежности

На чашках Петри

Для определения резус-фактора понадобятся чашки Петри, индивидуальные пипетки, раствор натрия хлорида изотонический, сыворотки стандартные для всех групп крови. Порядок проведения:

1. Капают рядом по две капли реагента двух серий для трех исследований (в три ряда).
2. В каждую из серий добавляют по капле исследуемой крови и эритроцитов (контрольных положительных и контрольных отрицательных).
3. Перемешивают, на десять минут ставят чашку на водяную баню (47°C).
4. Результат определяют по наличию или отсутствию хлопьев (слипшихся эритроцитов). Если красные клетки склеились, Rh положительный, если слипания не произошло, Rh отрицательный.

Определение Rh-принадлежности цоликлонами

Чтобы узнать резус-фактор, применяют моноклональные реагенты – цоликлоны, которые получают методом генной инженерии из асцитной жидкости мышей. Rh определяется во время реакции агглютинации, которая происходит на плоскости.

Алгоритм действий:

1. На планшет индивидуальной пипеткой капают большую каплю реагента (примерное количество – 0,1 мл).
2. Около реагента капают исследуемую кровь (маленькую каплю) или эритроциты в количестве 0,01 мл.
3. С помощью стеклянной палочки как следует смешивают реагент и кровь и каждые 30 секунд тарелку покачивают в течение трех минут, наблюдая за реакцией визуально.
4. Реакция агглютинации начинается через 15 секунд, явно выраженной становится через 1 минуту, но результат учитывают только спустя три минуты.

Если началась реакция агглютинации (склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок), кровь маркируют резус-положительной, если слипания красных клеток не наблюдается, резус-фактор отрицательный. Склеенные эритроциты, которые представляют собой хлопья, видны невооруженным глазом.

Результат трактуется в зависимости от того, произошла ли агглютинация красных клеток

Экспресс-метод

В качестве реагента применяется сыворотка под названием «антирезус», которая является универсальной для всех групп крови.

1. В пробирку помещают каплю крови (эритроцитов) в количестве 0,05 мл, затем добавляют 2 капли реагента «антирезус».
2. Пробирку поворачивают, не встряхивая, чтобы содержимое перемешалось и равномерно растеклось по стеклу.
3. Примерно через три-пять минут происходит склеивание эритроцитов.
4. Чтобы исключить агрегацию красных клеток, в пробирку добавляют раствор изотонический NaCl в количестве 2-3 мл и несколько раз переворачивают пробирку, чтобы содержимое перемешалось.
5. После этого считывают результат. Если появились хлопья на фоне более светлой жидкости, Rh положительный, если хлопьев нет, жидкость окрашена равномерно в розовый цвет, Rh – отрицательный.

Нужно сказать, что универсальные сыворотки могут дать ложноположительную реакцию с Rh-отрицательными эритроцитами. Может произойти неспецифичное склеивание красных клеток, на поверхности которых есть другие антитела – не атирезус. Поэтому параллельно проводят тестирование с контрольным раствором усилителя. Если после введения контрольного раствора происходит агглютинация, результат считается недостоверным, и тестирование повторяют с другим реагентом.

Пробирочный метод определения Rh

С применением желатина

Эта методика основана на применении желатина (в виде раствора 10 %). Для тестирования используются и стандартные антирезусные реагенты, и цоликлоны.

1. В пробирку капают одну каплю крови (0,05 мл) или эритроцитов в виде взвеси в сыворотке (50 %).
2. Затем 2 капли подогретого заранее до жидкого состояния раствора желатина.
3. Далее 2 капли реагента, затем смешивают.
4. Пробирку ставят на пять-десять минут на водяную баню (47°C) или на полчаса в сухой термостат с такой же температурой.
5. Затем в пробирку добавляют физиологический раствор (5-8 мл), закрывают крышкой и осторожно поворачивают два-три раза, чтобы перемешать.
6. Для определения наличия хлопьев содержимое пробирки осматривают невооруженным глазом на свет или через увеличительное стекло.

При использовании желатина не происходит неспецифической агглютинации. После проведения такой пробы необходимы контрольные тесты:

• со стандартными Rh+ эритроцитами;
• со стандартными Rh- эритроцитами;
• с исследуемой кровью (эритроцитами) и желатином.

Заключение

Информация о резус-факторе необходима в случае переливания крови. Для гемотрансфузии может быть использована только совместимая по группе и по резусу кровь. Кроме этого, следует определить резус-фактор во время беременности. Еще лучше узнать его на этапе ее планирования. Это необходимо, чтобы предотвратить резус-конфликт между Rh-положительным плодом и Rh-отрицательной женщиной.